什么是酶標(biāo)儀
酶標(biāo)儀即酶聯(lián)檢測儀。是酶聯(lián)吸附試驗的專用儀器又稱微孔板檢測器??珊唵蔚胤譃榘胱詣雍腿詣觾纱箢?,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個比色計,即用比色法來進行分析。
酶標(biāo)儀工作原理
工作原理為一臺升級的的分光光度計
酶標(biāo)儀與分光光度計的不同
1. 通量上:支持6、12、24、48、96、384孔板
2. 功能上:單功能酶標(biāo)儀(吸收光、化學(xué)發(fā)光、熒光)多功能酶標(biāo)儀
酶標(biāo)儀能做什么
凡是與光信號相關(guān)的實驗、需要高通量、需要節(jié)省試劑的實驗且可以轉(zhuǎn)移到微孔板中液體的物質(zhì),都可以考慮使用微孔板檢測儀(酶標(biāo)儀)進行信號檢測。
酶標(biāo)儀分類:
1.基于濾光方式不同可分為:濾光片式酶標(biāo)儀和光柵式酶標(biāo)儀(上海閃譜就是此類)
2.按功能劃分可分為:光吸收酶標(biāo)儀、化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀、熒光酶標(biāo)儀和多功能酶標(biāo)儀。
光吸收檢測常見應(yīng)用
1.DNA/RNA含量測定常用于快速檢測質(zhì)粒DNA濃度
2.ELISA(酶聯(lián)吸附試驗)檢測方法多(間接 法、競爭法、雙抗夾心法等)
3.細胞活力檢測MTT\XTT等酶活動力學(xué)檢測
光吸收法優(yōu)缺點:
1.優(yōu)點:靈敏、特異性、簡單、快速、對環(huán)境沒污染、穩(wěn)定易于自動化操作等。
2.不足:降低靈敏度(針對新方法其易受到雜質(zhì)干擾)、動態(tài)范圍比較窄(3數(shù)量級),步驟繁瑣(清洗步驟多)
化學(xué)發(fā)光檢測
發(fā)光是指物體吸收外加能量激發(fā),發(fā)出可見光
化學(xué)發(fā)光檢測又被稱為自發(fā)光檢測,這類檢測與其他檢測的區(qū)別在于,整個測試過程中需要提供外界光源。那么檢測器所捕捉到的光是來自于化合物的發(fā)光反應(yīng)(將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能)
熒光檢測
熒光檢測特點:應(yīng)用領(lǐng)域廣、可多標(biāo)記檢測、靈敏度高
熒光檢測常見應(yīng)用:
1.生物大分子(DNA/RNA或蛋白質(zhì))
2.熒光(熒光標(biāo)記物,如GFP\YFP\CFP等)
3.細胞學(xué)分析(細胞增殖、細胞毒理、細胞遷移、細胞吸附、細胞滲透)
4.線粒體膜電位分析
5.鈣流檢測
操作注意事項
酶標(biāo)儀的功能是用來讀取酶聯(lián)試劑盒的反應(yīng)結(jié)果,因此要得到準(zhǔn)確結(jié)果,試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標(biāo)儀之前是通過目測判斷結(jié)果,操作過程隨意性較大,在使用酶標(biāo)儀后如果不能及時糾正操作習(xí)慣,會造成較大誤差。在酶標(biāo)儀的操作中應(yīng)注意以下事項:
1.使用加液器加液,加液頭不能混用。
2.洗板要洗干凈。如果條件允許,使用洗板機洗板,避免交叉污染。
3.嚴格按照試劑盒的說明書操作,反應(yīng)時間準(zhǔn)確。
4.在測量過程中,請勿碰酶標(biāo)板,以防酶標(biāo)板傳送時擠傷操作人員的手。
5.請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部,操作完成后請洗手。
6.如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害,請嚴格按照試劑盒的操作說明,以防對操作人員造成損害。
7.如果儀器接觸過污染性或傳染性物品,請進行清洗和消毒。
8.不要在測量過程中關(guān)閉電源。
9.對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差,應(yīng)根據(jù)實際情況及時修改參數(shù),以達到最佳效果。
10.使用后蓋好防塵罩。
11.出現(xiàn)技術(shù)故障時應(yīng)及時與廠家聯(lián)系,切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀。
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