1、什么是生物安全柜？
生物安全柜是實驗室生物安全的一級安全隔離屏障，也是實驗室最為關(guān)鍵的安全防護設(shè)備。是防止操作過程中含有危險性生物氣溶膠散逸負壓空氣凈化排風(fēng)柜，生物安全柜最主要和關(guān)鍵的部件是高效空氣過濾器（HEPA）。
2、生物安全柜的用途？
是用于各類生物安全實驗室從事實驗診斷和原代培養(yǎng)物、菌毒株及其他檢測樣本等具有感染性的生物材料的操作，具有保護操作者、實驗環(huán)境以及實驗樣品的安全防護設(shè)備。
3、安全柜根據(jù)氣流及隔離屏障設(shè)計結(jié)構(gòu)分為幾個等級？
分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三個等級。
A型又分為A1 型生物安全柜和A2 型生物安全柜
B型又分為B1 型生物安全柜和B2 型生物安全柜
4、Ⅰ級生物安全柜及其用途？
Ⅰ級生物安全柜用于對人員及環(huán)境進行保護，對受試樣本無保護且能滿足危害等級Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級致病因子要求的生物安全柜。前窗操作口向內(nèi)吸入的負壓氣流保護人員的安全；排出氣流經(jīng)高效過濾器過濾后排出保護環(huán)境不受污染。適用于不要求對檢測樣品的保護。經(jīng)過樣品區(qū)的空氣，經(jīng)高效過濾器過濾后100%排放到實驗室環(huán)境中。
用途：用作特殊的密封設(shè)備（如離心、收獲設(shè)備或小的發(fā)酵設(shè)備）或可能產(chǎn)生氣溶膠的操作過程（如通氣培養(yǎng)或組織攪拌）。相當(dāng)于安全通風(fēng)柜。
5、Ⅱ級生物安全柜及其用途？
Ⅱ級生物安全柜用于對人員、樣本及環(huán)境進行保護，且能滿足危害等級Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級致病因子要求的生物安全柜。有前窗操作口的安全柜，操作者可以通過前窗操作口在安全柜內(nèi)進行操作，前窗操作口向內(nèi)吸入的負壓氣流保護人員；經(jīng)高效過濾器過濾的垂直下降氣流保護產(chǎn)品；污染氣流經(jīng)高效過濾器過濾后排出保護環(huán)境。
6、Ⅱ級安全柜按排放氣流占系統(tǒng)總流量的比例及內(nèi)部設(shè)計結(jié)構(gòu)分型？
Ⅱ級安全柜按排放氣流占系統(tǒng)總流量的比例及內(nèi)部設(shè)計結(jié)構(gòu)分為A1、A2、B1、B2四種類型。
7、Ⅱ級A1型生物安全柜及使用？
工作窗口進風(fēng)氣流和工作區(qū)垂直氣流混合后進入安全柜上部的箱體，前窗操作口流入氣流的最低平均流速為0.40m/s；下降氣流為安全柜的部分流入氣流和部分下降氣流的混合氣體，經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū)；污染氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后可以排到實驗室或經(jīng)安全柜的外排接口通過排風(fēng)管排到大氣中，70%氣體循環(huán)使用，30%排到室內(nèi)或室外；安全柜內(nèi)的污染部位可以處于正壓狀態(tài)，并且這些正壓區(qū)域可以沒有負壓區(qū)域包圍。不能用于有揮發(fā)性有毒化學(xué)品和揮發(fā)性放射性核素的實驗。
工作窗口進風(fēng)氣流和工作區(qū)垂直氣流混合后進入安全柜上部的箱體，前窗操作口流入氣流的最低平均流速為0.50m/s。下降氣流為部分流入氣流和部分下降氣流的混合，經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū)。污染氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后可以排到實驗室或經(jīng)安全柜的外排接口通過排風(fēng)管道(軟連接)排到大氣中。70%循環(huán)使用，30%外排。
安全柜內(nèi)所有污染部位均處于負壓狀態(tài)或者被負壓通道和負壓通風(fēng)系統(tǒng)環(huán)繞。
用途：用于進行以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物實驗時，必須連接功能合適的排氣罩。應(yīng)用最廣泛；回風(fēng)道為負壓，并且通過排風(fēng)管道將安全柜排出的氣體引入室外，即使排風(fēng)HEPA泄露時也不會導(dǎo)致對操作人員造成危險。
9、Ⅱ級B1型生物安全柜及使用？
工作窗口進風(fēng)氣流和工作區(qū)垂直氣流混合后進入安全柜上部的箱體，前窗操作口流入氣流的最低平均流速為0.5m/s，下降氣流大部分由未污染的流入氣流循環(huán)提供，經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū)。大部分被污染的下降氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后通過專用的排氣管道(硬連接)排入大氣中；70%氣流經(jīng)過濾后外排（要求排到室外）、70%外界空氣補充、30%氣流經(jīng)過濾后循環(huán)使用。
用途：安全柜內(nèi)所有生物污染部位均處于負壓狀態(tài)或者被負壓通道和負壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍。如果揮發(fā)性有毒化學(xué)品或放射性核素隨空氣循環(huán)不影響實驗操作或?qū)嶒炘诎踩竦闹苯优艢鈪^(qū)域進行，B1型安全柜可以用于以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物實驗
工作區(qū)域氣流全部來自實驗室或室外，排風(fēng)經(jīng)過高效過濾器過濾后直接排至室外，前窗操作口流入氣流的最低平均流速為0.50m/s；下降氣流來自經(jīng)過高效過濾器過濾的實驗室或室外空氣(即安全柜排出的氣體不再循環(huán)使用)；流入氣流和下降氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后通過專用排氣管道(硬連接)排到大氣中， 不允許回到安全柜和實驗室中；100%氣流經(jīng)過濾后外排；100%外界空氣補充；無循環(huán)使用的氣流。
用途：所有污染部位均處于負壓狀態(tài)或者被直接排氣（不在工作區(qū)循環(huán)）的負壓通道和負壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍。B2型安全柜可以用于以揮發(fā)性有毒化學(xué)品和放射性核素為輔助劑的微生物實驗。適用于生物安全1、2、3級的樣品。
11、A型和B型生物安全柜的區(qū)別和使用？
12、Ⅲ級生物安全柜及用途？
完全密閉、不泄露結(jié)構(gòu)的通風(fēng)柜能滿足操作生物危害等級Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級致病因子要求的生物安全柜。沒有開放式觀察窗，人員通過與柜體密閉連接的手套在安全柜內(nèi)實施操作；安全柜內(nèi)對實驗室的負壓應(yīng)不低于120Pa；下降氣流經(jīng)高效過濾器過濾后進入安全柜。排出氣流經(jīng)兩道高效過濾器過濾后排至室外。100%氣流經(jīng)過濾后外排進入環(huán)境、100%外界空氣補充、無循環(huán)使用的氣流。流入風(fēng)速：≥0.7m/s，Ⅲ級生物安全柜為操作4級生物安全水平的微生物病原體設(shè)計。Ⅲ級安全柜通常只是在最高圍護功能的實驗室內(nèi)安裝，這些實驗室具有控制出入和特殊通風(fēng)要求或其它支持系統(tǒng)（例如高壓蒸汽）。
用途：用于操作危險度4級的微生物材料，可以提供最好的個體防護。所有接口都是密封的（只有通過連接在柜上的結(jié)實的橡膠手套，手才能伸到工作臺面），其送風(fēng)經(jīng)HEPA過濾，排風(fēng)則經(jīng)過兩個HEPA過濾器。
13、如何正確使用生物安全柜？
（1）生物安全柜的垂直可移動窗開啟與關(guān)閉應(yīng)輕便，在行程范圍內(nèi)的任何位置不產(chǎn)生卡死現(xiàn)象，不應(yīng)有明顯的左右或前后晃動現(xiàn)象，滑動應(yīng)順暢。開關(guān)、按鍵的操作應(yīng)靈活可靠，零部件應(yīng)緊固無松動，指示正確。
（2）工作前預(yù)先放好實驗材料、不要放置過多器材
（3）從清潔區(qū)到污染區(qū)平行擺放、標(biāo)本放左試劑等放右。
（4）在開始工作前到完成工作后，應(yīng)至少讓安全柜工作4分鐘來完成“凈化”過程
（5）在工作區(qū)域工作、生物安全柜處于正常工作狀態(tài)時，不應(yīng)有明顯的機震聲
（6）不阻斷前后空氣格柵、減少干擾氣流
（7）及時清潔和消毒溢出
（8）最好用一次性接種環(huán)、電加熱器滅菌接種環(huán)
（9）操作過程中廢棄物放在生物安全柜內(nèi)
（10）不宜在生物安全柜內(nèi)使用明火，明火易造成氣流動蕩，破壞高效過濾（HEPA）起源吹向臺面的模式
（11）按照使用說明書指導(dǎo)正確使用和維修
14、如何進行工作前的自凈和消毒？
（1）在工作前要讓生物安全柜的風(fēng)機至少運行3-5分鐘，使柜內(nèi)的空氣實現(xiàn)自凈。
（2）安全柜的工作臺面、內(nèi)壁（不包括送風(fēng)濾器擴散板）和觀察窗的內(nèi)表面用消毒劑擦拭。消毒后再用無菌蒸餾水進行擦拭以清除殘余消毒劑。
（3）放到安全柜的容器和材料的表面使用70%乙醇擦拭，以減少將環(huán)境的雜菌帶到安全柜內(nèi)。
（4）定期對孵箱和冰箱進行消毒。
15、如何對工作結(jié)束時的表面消毒？
工作完成時，所有的容器和設(shè)備應(yīng)該進行表面消毒并拿出安全柜。在每天工作結(jié)束時，應(yīng)該對安全柜進行最后的表面消毒，包括工作臺面、安全柜的邊壁、后壁和觀察窗玻璃內(nèi)部的擦拭。如果必要，安全柜也應(yīng)進行放射性檢測并進行必要的消毒。作為安全的微生物學(xué)操作的最后步驟，操作者應(yīng)該摘下手套、脫下工作服并且洗手。
16、發(fā)生少量噴灑時的如何消毒？
在生物安全柜內(nèi)發(fā)生少量的噴灑時，應(yīng)用污吸濕材料立即進行處理，并將使用過的紙巾放到生物危害包里。對安全柜內(nèi)的所有物品和安全柜內(nèi)部，用浸滿消毒液的毛巾立即進行擦拭消毒。
17、發(fā)生大量溢出時的如何消毒？
當(dāng)發(fā)生大量的溢出時，液體會通過前面或后部的格柵流到下面去，這時要求更廣泛的消毒。安全柜內(nèi)的所有的物品應(yīng)該進行表面消毒并拿出安全柜。使消毒液維持30分鐘的適當(dāng)接觸時間。如果溢出的液體含有放射性材料，可采取類似的程序。并應(yīng)該與輻射安全人員聯(lián)系，尋求特殊的指導(dǎo)。
18、生物安全柜的如何日常維護？
（1）定期清潔操作臺面和前窗玻璃；
（2）保持室內(nèi)空氣質(zhì)量,延長高效過濾器使用壽命；
（3）定期檢測紫外燈的照射強度,及時更換燈管；
（4）長期不用應(yīng)定期進行維護性運行；
（5）高效過濾器應(yīng)定期檢測，及時更換；
（6）做好使用和維護記錄
19、生物安全柜的檢測要求？
根據(jù)WS 233-2002《微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通用準則》 的相關(guān)規(guī)定：有下列情況之一時，必須對Ⅱ級生物安全柜進行現(xiàn)場檢測 :
（1）實驗室施工時，Ⅱ級生物安全柜搬放到指定位置后。
（2） Ⅱ級生物安全柜被移動位置后。
（3） 對Ⅱ級生物安全柜進行檢修后。
（4） Ⅱ級生物安全柜更換高效過濾器后。
（5） Ⅱ級生物安全柜一年一度的常規(guī)現(xiàn)場檢測
20、生物安全柜分類比較
21、生物安全柜如何檢測潔凈度？
ISO14644根據(jù)懸浮粒子濃度這個唯一指標(biāo)來劃分潔凈室（區(qū)）及相關(guān)受控環(huán)境中空氣潔凈度的等級。
檢測懸浮粒子使用懸浮粒子計數(shù)器，臨床微生物室不會有該設(shè)備的，因此該指標(biāo)無法檢測
比如ISO5中0.5um指標(biāo)每立方米3520，換算成每立方英尺即為100（1m3=35.2立方英尺），這就是常說的百級潔凈區(qū)。
結(jié)合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》等涉及到微生物檢測指標(biāo)的潔凈室，我們推算出ISO5級的微生物指標(biāo)菌均小于1，其中沉降菌比較容易檢測，但是要求檢測時間4h。您可以參考《GB 16294-2010 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌的測試方法》。
簡易流程：
1、非選擇培養(yǎng)基，如血培養(yǎng)基或MH培養(yǎng)基
2、生物安全柜運行15-30min后，將培養(yǎng)基均勻放在安全柜臺面上（大于3點，最好為5點），5點有點浪費，如果4h容易風(fēng)化變干，應(yīng)放置2h（4h用2塊）或1h（2h用4塊），這樣更加浪費了。
3、采集完成，培養(yǎng)基蓋蓋后培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h
4、統(tǒng)計計數(shù)，判斷是否合格。
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